EL TRATAMIENTO CON EL ANTICUERPO ANTI-PROTEOGLICANO CHP3R99 NO AFECTA LA BIOENERGÉTICA MITOCONDRIAL EN RATONES / The anti-proteoglycan antibody chP3R99 treatment does not affect mitochondrial bioenergetic in mice

Resumen

Los proteoglicanos son moléculas biológicas importantes que participan en la retención de las lipoproteínas pro-aterogénicas en la pared arterial y también son cruciales para la remoción hepática segura de las lipoproteínas aterogénicas remanentes circulantes. Recientemente obtuvimos un anticuerpo monoclonal quimérico nombrado chP3R99 que reacciona con moléculas sulfatadas, incluyendo los proteoglicanos. Aunque se conoce la química de la interacción proteoglicanos-lipoproteínas de baja densidad, las consecuencias de su inhibición por el anticuerpo chP3R99 sobre el metabolismo de lípidos y el estado redox mitocondrial no se han estudiado todavía. Es por eso que en el presente trabajo intentamos caracterizar la función de las mitocondrias hepáticas de ratones C57BL6 tratados subcutáneamente con 50 µg de chP3R99 (semanalmente durante 3 semanas). Los orgánulos se aislaron bajo condiciones estándares y se determinó el estado del NAD(P)H, la susceptibilidad a la ocurrencia del poro de permeabilidad mitocondrial y la producción de especies reactivas de oxígeno. Por otro lado, también se determinaron los niveles séricos de colesterol, triglicéridos, LDL-colesterol y HDL colesterol. Los resultados mostraron que no se produjeron cambios significativos en los niveles lipídicos entre los grupos. El estado mitocondrial del NAD(P)H no se afectó por el tratamiento con chP3R99 ni tampoco se indujo el poro de transición de permeabilidad mitocondrial ni incremento en la producción de especies reactivas de oxígeno. Los resultados demostraron que el tratamiento con cchP3R99 no interfiere con el metabolismo lipídico en ratones normo-lipémicos. Al mismo tiempo, la ausencia de efectos de este anticuerpo sobre los parámetros mitocondriales evaluados demostró que su tratamiento no afectó el estado redox mitocondrial hepático. Sin embargo, es obvio que se necesitan otros estudios toxicológicos para establecer el riesgo potencial del uso de esta inmunoterapia anti-proteoglicanos.

Palabras clave: Mitocondria, anticuerpo monoclonal, proteoglicano, NAD(P)H, especies reactivas de oxígeno

Abstract

The proteoglycans are important biological molecules that participate in the retention of proatherogenic lipoproteins in the arterial wall, but also they are crucial for safe hepatic removal of atherogenic remnant lipoproteins from the circulation. Recently we obtained a monoclonal chimeric antibody named chP3R99 that reacts with sulfated molecules, including proteoglycans. Although the chemistry of low-density lipoprotein-proteoglycans interaction has been explored, the consequences of its inhibition by chP3R99 antibody on lipid metabolism and mitochondrial redox status have not been studied yet. Therefore, in the present work we characterized the liver mitochondrial function from C57BL6 mice subcutaneously treated with 50 µg of chP3R99 (weekly during 3 weeks). Hepatic mitochondria were isolated under standard procedures and their NAD(P)H status, susceptibility to permeability transition pore occurrence, and reactive oxygen production were assessed. On the other hand, the serum cholesterol, triglycerides, LDL-cholesterol and HDL-cholesterol were also determined. The results showed no significant changes of serum lipids levels among groups. The mitochondrial NAD(P)H status was no affected by chP3R99 treatment, neither mitochondrial permeability transition pore nor reactive oxygen species production were induced. Our results demonstrated that chP3R99 treatment does not interfere on lipid metabolism in normolipemic mice. Also, the lack of chP3R99 effect on the evaluated mitochondrial parameters demonstrated that the treatment with this antibody did not affect the hepatic mitochondrial redox status. Nevertheless, further toxicological studies should be performed to address the potential risks associated with the use of anti-proteoglycans immunotherapy.

Keywords: Mitochondria, monoclonal antibody, proteoglycans, NAD(P)H, reactive oxygen species